发布日期：2025-03-22 17:57 点击次数：146
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实验一 微量吸管、显微镜、血细胞计数盘的使用
【办法要求】
1、掌捏微量微量吸管（血红卵白吸管）的吸液操作技能；
2、掌捏牛-鲍氏计数盘细胞使用及影响因素。
3、老到老到光学显微镜的旨趣；
4、老到对显微镜如何进愚弄用与调理；
一、显微镜的使用
【旨趣】
当被不雅察物体置于物镜前的焦点稍辽远时．物体反射的后光经物镜放大后成一倒立实像位于目镜前焦点隔壁．再经目镜放大呈倒立虚像位于不雅察者的明视距离(约250mm)处。
【器材】
光学显微镜、载物片(瑞氏染色血涂片)、擦镜纸。
【试剂】
香柏油、清洁液（酒精：乙醚：3：7）
【操作】
1．准备 将光学显微镜舍弃在采光好的实验台上，幸免振动。朝上动掸粗调螺旋至一定高度后，将载物片放于载物台上。
2．调焦与低倍镜不雅察 将10×低倍物镜瞄准镜筒，动掸粗调螺旋使物镜下落到快宣战标本处后，选拔平面反光镜的角度，调整聚光器的高下高度和光栅大小，使目视亮度妥当，再用细调螺旋高下调遣焦点，使物像清澈。
低倍镜常用于全片浏览，不雅察标本的总体分散，对骨髓增生进程判定和对尿中管型、粪便中寄生虫等的历练。
3．高倍镜不雅察 转念40倍物镜瞄准镜筒，一般不需再行调焦，仅调遣细螺顷刻可看到清澈物像。
高倍镜常用于血细胞计数、体腔液、排泄物和分泌物的不雅察。
4．油镜不雅察 于瑞氏染色血涂片体尾接壤处滴加香柏油一小滴，将玻片放在载物台上。使油镜头(100×)瞄准镜筒，动掸粗调螺旋使之降至与玻片轻轻宣战。然后升高聚光镜使其与载物台平王人，将光栅放至最大．选拔凹面反光镜调遣角度，使射入后光最强。再动掸粗调螺旋使物镜高潮，待见到标本中物像后．调遣细调螺旋使物像清澈，对标本进行功令不雅察。
油镜最常用于血液、骨髓或零碎细胞标本的形态学不雅察和分类。
5．收镜 显微镜使用终结，取下载物片，用擦镜纸将油镜头揩干净(必要时可滴一滴清洁液于擦镜纸上)。用绸布擦抹镜身，将物镜转成“八”字形(勿使物镜与目镜相对)，镜筒、聚光器下落至最低处，反光镜放水平位，以右手捏镜臂，左手托镜座，轻轻放东说念主显微镜箱内。
[留隐衷项]
1．要培养精真金不怕火的操魄力气．职责台与凳子高度要合适，坐姿礼貌，胸背挺直，两目睁开。单筒镜用左眼不雅察，双筒镜防范调好瞳距。
2．使用螺旋时要防范，当对焦时以动掸粗调螺旋为主，尽量少用细调螺旋，以蔓延机械系统的寿命。在转念高倍镜，极度是油镜不雅察时，切记粗调螺旋只可将镜头上移而不行下移，以免压碎载物片，碰坏镜头。
3．香柏油折射率为1.51525，与透镜折射率邻近，能升迁分辨率，防范用时不宜过多。用后要实时擦去，不然可引起显微镜损坏。如香柏油蒸发变浓，可用二甲苯稀释。
4．光学系统清洁，一般情况下可用洗耳球吹气、小毛刷刷除仪器名义的灰尘。当光学系统有浑浊时，可用擦镜纸蘸清洁液擦抹，如被尿、便等浑浊时可用棉签蘸1％氨水擦抹浑浊区。
5．显微镜存放的环镜条目应防震、防潮、防尘、防日晒、防温差过大。
二、微量吸管的使用：
【旨趣】
挤压乳胶吸头使刻度微量吸管产生负压而吸取液体。
【器材】
一次性微量吸管和带孔乳胶吸头、小号试管、干棉球、2ml吸管或2ml加液瓶
【试剂】
生理盐水、95％（V/V）酒精、乙醚、蒸馏水
【标本】
抗凝血1ml～2ml/东说念主（练惯用）
【操作】
1.准备吸管：将带孔胶乳吸头套在微量吸管上，防范两者领略处应严实不透气。
2.加稀释液：取试管1支，加盐水2ml。
3.持管吸血：
（1）小孔位于胶乳吸头尖端的持管吸血法：右手拇指和中指夹住吸管与吸头接壤处，食指盖住吸头小孔，三指隐微用劲，摒除适量的气体使管内形成负压，将管尖插入抗凝血，三指渐渐削弱，准确吸取抗凝血到所需（10/20μl）刻度后抬起食指。
（2）小孔位于胶乳吸头侧面的持管吸血法：右手中指和无名指夹住微量吸管的上端（即近胶乳吸头端），拇指和食指夹住胶乳吸头，拇指盖住吸头侧面的小孔，拇指和食指隐微用劲摒除适量的气体使管内形成负压，将管尖插入抗凝血中渐渐削弱准确吸取抗凝血到所需10μl/20μl刻度后，将管尖离开抗凝血抵在左手无名指上，抬起拇指。
4.拭净余血：用干棉球沿吸管上端向吸管口标的拭净管口余血，如血液杰出刻度线，可用干棉球轻轻吸出少许，使其归还到刻度线。
5.开释血液：将吸管插入含有生理盐水的试管底部，渐渐排出吸管内的血液，再用上清液冲洗管内余血2～3次，立行将试管内的液体混匀。
5.洗涤吸管：瓜代用蒸馏水洗净，95％（V/V）酒精脱水，乙醚干燥。如为一次性微量吸管，可概略该法子。
【留隐衷项】
1.微量吸管插入血液吸血时永恒不要离开液面，以免吸入气泡；
2.吸血时要用劲适应，不要用劲过度，将血液吸入胶乳吸头；
3.若吸血量杰出刻度2mm以上，则应更换吸管，以免粘附管壁的血液过多而影响终结。
【次第学评价】
使用微量吸管是手工法血液一般检查的第一步，因为这是手工操作，有许多因素影响历练终结的准确性和精密度，如吸管的质料、操作家的技能熟练进程和包袱心等。应用全自动血细胞分析仪时，多需要采静脉血，以克服手工操作的不足。
三、血细胞计数盘的使用
【旨趣】
一定倍数稀释的血液或体液，混匀后滴入具有固定体积和精密差异刻度的血细胞计数盘中，在显微镜下对所选拔区域中的细胞进行计数，再乘以稀释倍数，即可换算成单元体积内的细胞数。
【器材】
改良牛鲍（Neubauer）计数板（血细胞计数板）、盖玻片、显微镜、绸布、微量吸管、试管
改良牛鲍计数板：改良牛鲍计数板由优质玻璃制成，每块计数板由“H”型槽沟分割为两个相似大小的计数池，计数池两侧各有一条扶直柱，比计数池平面杰出0.10mm，将特制的专用盖玻片粉饰其上，形成高0.10mm的计数池，计数池长、宽各3.0mm，平均分为9个大格，每个大格面积为lmm2，容积为0.lmm3（µl）。在这9个大格中，中央大方格用双线分红25个中方格，每个中方格又用单线分为16个小方格，其中位于正中及四角的5个中方格的是红细胞和血小板计数区。四个角的四个大方格分别用单线分为16中方格，是白细胞计数区。
【试剂】
1.白细胞稀释液 (见毛细血管采血法)
2.红细胞稀释液(见毛细血管采血法)
【标本】
外周血
【操作】
1.准备计数板：用绸布拭净血细胞计数板和盖玻片，选定推压法从计数板下角落上前平推盖玻片，将其盖在计数池上。
2.稀释血液：取2支小试管，表明A、B，分别加入白细胞稀释液0.38ml和红细胞稀释液2ml，再各加抗凝血20μl、10μl，混匀备用。
3.充池：充分混匀A液，用微量吸管吸取稀释血液滴入计数板和盖玻片接壤处，利用虹吸法让液体顺其破绽充满计数池；再取B液，以相似次第在另一侧计数板充池。
4.静置：计数板充池后应平置于桌面上静置2～3min，待细胞下千里。
5.计数：先用低倍镜不雅察通盘这个词计数板的结构(大、中、小方格)及特征，同期不雅察血细胞分散是否均匀，如严重分散不均，应再行充池。在充A液的计数池不雅察白细胞计数鸿沟，在充B液的计数池不雅察红细胞计数鸿沟。
【留隐衷项】
1．保证计数板和盖玻片清洁。操作中勿让手指宣战计数板名义，以防浑浊，致使充池时产不满泡。
2．一次完成充池，如充池过少、过多或有气泡，应拭净计数板及盖玻片后再行操作。
3．平放计数板，不行在充池后移动盖玻片。
4．计数池内如细胞分散严重不均，应再行充池。计数红细胞用高倍镜，计数白细胞用低倍镜．
5．凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则．幸免漏数或重复计数．注签订别非细胞因素。
6．如使用血液充池，计数板和盖玻片使用后应瓜代用95％(v／v)酒精、蒸馏水棉球擦抹，临了用清洁绸布揩净．千万勿用粗拙织物擦抹，以免磨损计数板上的刻度。
7.充池量不可过多或过少，使细胞充分千里淀后再计数。白细胞和红细胞计数一般需千里淀2～3min，血小板应千里淀15～30min，且需防范保湿，因千里淀时代过长会因稀释液蒸发形成计数终结不准确。
【次第学评价】
使用血细胞计数板进行细胞计数是临床历练最常用的基本功之一。当今虽有各式自动化分析次第，但该次第由于经典、方便、实用，仍较平素用于临床历练和科研实行中。
该法产生技能瑕玷的主要因素包括：①微量吸管和计数板的质料。②采血、稀释、混匀、充池等操作是否表率。②计算是否正确。④细胞计数的固有瑕玷随计数数量的加多而减少。
实验二 毛细血管采血、WBC 计数
【办法要求】
1、掌捏毛细血管采血的次第，了解不同部位采血对历练终结的影响；
2、掌捏显微镜法WBC计数的旨趣及次第；
3、老到 WBC 增高和减少的临床料想。
一、毛细血管采血法
【旨趣】采血针戳破毛细血管后血液当然流出，用微量吸管吸取一定量的血液。
【器材】一次性消毒采血针、一次性微量吸管、小试管、75％（V／V）酒精棉球、无菌干棉球。
【试剂】白细胞稀释液
【标本】外周血
【操作】
凡仅需极微量（数滴以内）血液的历练均可用毛细血管采血法。即以刺血针穿剌已消毒的皮肤，使毛细血管血液当然流出，实时选定进行历练。
1．准备：取试管1支，加入白细胞稀释液0.38ml。取一次性微量吸管和乳胶吸头衔接，检查领略处是否漏气。
2．推拿：轻轻推拿左手中指或无名指指尖内侧，使局部组织当然充血。
3．消毒：用75％酒精棉球擦抹采血部位皮肤，待干。
4．针刺：用左手拇指和食指固定采血部位使其皮肤和皮下组织绷紧，右手持一次性消毒采血针自指尖腹内侧迅速刺入，深度2～3mm，立即出针。(竖直进针)
5.拭血：待血液当然流出后，用无菌干棉球擦去第1滴血。
6.吸血：血液当然流出时，用一次性微量吸管吸血至20μl刻度，然后用无菌干棉球压住伤口止血。如血流不畅，不错用左手自采血部位远端向指尖稍施压使血液流出。
7.稀释：用无菌干棉球擦干净微量吸管外部后，将吸管伸入装有白细胞稀释液的试管底部，渐渐排出吸管内的血液，并用上清液冲洗管内余血2～3次，临了将试管内的液体混匀。
【留隐衷项】
1.所选拔采血部位的皮肤应完好意思，无烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症等，以免影响终结及形成感染扩散。除稀奇情况外，不要在耳垂采血。半岁以下婴幼儿由于手指小，可自拇指、脚趾或足跟内、外侧缘采血；严重烧伤者可选皮肤完好意思处采血。
2.本试验具有创伤性，必须严格按无菌技能操作，退避采血部位感染；作念到一东说念主一针一管，幸免交叉感染，最好用一次性采血管。
3.皮肤消毒后，应待酒精蒸发后采血，不然流出的血液扩散而不成滴。
4.进出针速率要迅速，且伤口要有饱和的深度。
5.因第1滴血混有组织液，应擦去。如血流不畅切勿用劲挤压，以免形成组织液混入，影响终结的准确性。
6.在进行多项检查时，汇注血液标本的功令是血小板计数→红细胞计数→血红卵白测定→白细胞计数与分类。如采血用于自动血液分析仪，最好以优质无菌纸巾擦血，以免棉纤维混东说念主，形成仪器堵孔。
【次第学评价】
血液标本的正确汇注是得到正确、可靠实验终结的要道。汇注前应仔细接头实验需要决定采血量。
耳垂血：痛感较轻、适于反复采血，但血轮回较差，血细胞容易停滞，常形成终结比静脉血高，且由于严寒、炎热等情况可导致波动较大。
手指血：操作方便，能得到充足量血液，终结较恒定，与静脉血互异较小，但痛感较重，操作不当可导致组织液混入血液，形成检查终结偏低
如要获的更具代表性的血细胞检测终结，静脉采血首选。
二、WBC计数
【旨趣】用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同期阻碍熔解红细胞，而白细胞中核卵白被其凝固变性，仍保留其形态。结晶紫可使白细胞隐微着色而便于识别。
将稀释的血液注入血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。
【器材】显微镜、改良Neubauer计数板、试管、吸管、微量吸管
【试剂】白细胞稀释液：2%冰乙酸溶液中加东说念主10g／L结晶紫（或亚甲蓝）3滴。
【标本】清新全血或末梢血
【操作】
1.加稀释液: 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。
2.吸取血液: 用微量吸管吸取清新全血或末梢血20μl，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取表层白细胞稀释液清洗吸管2～3次。
3.混匀： 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。
4.充池：再次将小试管中的细胞悬液混匀。用一次性Hb吸管吸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2～3min，待白细胞完全下千里。
5.计数： 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总和，并记载数据。
6.计算:WBC=[(四个大方格内WBC总和N)/4]×10×20×106＝（N/20）×109/L
【终结讲述】：
WBC=X.X×109/L
【留隐衷项】
1.稀释用的吸管、微量吸血管、血细胞计数板均为计量器用，使用前需经过严格的校正，不然将径直影响计数终结的准确。
2.使用标本可为由静脉穿刺选定的清新全血，也可为静脉末梢血。汇注末梢血时，应防范采血部位不得有冻疮、水肿、发绀、炎症等，以免标本失去代表性；同期也应防范不行过度挤压，以免组织液混东说念主引起血液凝固或形成计数终结不准确。
3.充池时，如充液不足、液体外溢、断续充液，或产不满泡、充液后移动盖玻片等，均会使细胞分散不均匀，形成计数终结不准确。
4.计数池内的细胞分散应均匀，一般情况下各大方格间的细胞数进出不杰出10％。若进出太大，应再行充池。
5.计数方格内的压线细胞时，治服数上不数下、数左不数右的原则。
6.白细胞数量过多时，可选定加大稀释倍数的次第。如20μl血加入到0.78ml稀释液中或10μl血加入到0.38ml稀释液中。
7.白细胞数量过少时，可选定扩大计数域的次第，计数8个或9个大方格；也可选定减少稀释倍数的次第。
8.白细胞稀释液不行阻碍有核红细胞，它可使白细胞计数终结偏高，此时应计算白细胞校赶巧。
【参考鸿沟】
成东说念主 (4-10)× 109/L
更生儿〈 15－20 〉× 109/L
6 月-2 岁(11-12 )× 109/L
实验三 实验四 毛细血管采血、血涂片制备与染色、WBC分类计数
【办法要求】
1、 掌捏瑞氏染色旨趣，次第和影响因素。
2、 熟练掌捏血膜制备的要求、技能和留隐衷项。
3、 掌捏显微镜外周血白细胞分类计数的次第
4、 掌捏外周血正常和颠倒白细胞染色后的形态特征，白细胞分类计数；
5、了解白细胞分类的临床料想，
【器材】 光学显微镜、一次性 Hb 吸管、血细胞计数盘、小号试管、载玻片、推片
【试剂】
1.瑞氏染液
① 600ml甲醇 (AR )中含瑞氏染料1.0g，清新配制的染料偏碱，需在室温或 37 ℃贮存一定时代，待染料“教育”一主淌若好意思兰逐渐篡改为天青B后才智使用。
②磷酸盐缓冲液(PH6.4-6.8 )
磷酸二氢钾（KH2P04）0.30g，磷酸氢二钠(Na2HP04)0.20g，用小数蒸馏水熔解后，再加蒸馏水至100Oml，配成后用磷酸盐溶液调整 PH。
一、血涂片制备
（一）操作
1. 用血红卵白吸管吸取已混匀抗凝血少许，置于载玻片的右端约 1/5 处，把推片的一端放在血滴的前方，将推片略向后移，使与血滴相宣战，让血滴在推片与载玻片的夹角间散开。
2. 使推片与载玻片间形成 30-45度角，自由地上前推进至载玻片的另一端，载玻片上留住一薄层血膜。制成的血膜应厚薄妥当，分散均匀，无空泡且不波及角落，有头体尾之分。
(二)留隐衷项
1. 滴血量不宜太多，不然容易制成厚片 .
2. 推片与载玻片的夹角为30-45度角，角度越大，推片速率越快，则血膜越厚，反之血膜越薄。
3. 血膜分散不匀有空泡等，主要由于推片不整王人，用劲不均匀或太重以及载玻片不清洁所致。
二、血膜染色
（一）旨趣
瑞氏染料为酸性伊红和碱性好意思兰组成的复合染料，在甲醇中离解为带正电荷的好意思蓝（M+）和带负电荷的伊红（E+），血细胞与染料宣战，其中带负电荷和正电荷的物资分别与上述染料勾搭而形成蓝色或红色，中性物资成等电状态，与好意思蓝和伊红均可勾搭，形成紫红色。在正常周围血抹片中把柄染色特色和形态不同可将白细胞分为几类。由于细胞各式因素均为卵白质组成，染色时对氢离子浓度十分明锐，故染色必须加入缓冲液。
（二）操作
于血抹片上滴加瑞氏染液 3-5 滴，以染液复盖通盘这个词血膜为度，固定1分钟许，滴加约等量的缓冲液与染液夹杂，再染色10±分钟，用净水冲去染液，待当然干燥即可镜检。
三、WBC分类计数
（一）旨趣
将血液制成细胞分散均匀的血涂片，用瑞氏染液染色，把柄种种细胞的形态特色和神采互异将白细胞进行分类计数。频频刻类100个白细胞，计算得出各式白细胞所占的百分率。
（二）操作
1．将染色风干后的血涂片放于显微镜载物台上。
2．低倍镜不雅察全片WBC分散、数量和染色情况，选拔血膜的体尾接壤处，细胞分散均匀、着色精真金不怕火的区域，滴香柏油1滴。
3．在油镜下按一定功令呈“弓”字形的移动视线，对所见到的每个WBC进行分类，并用纸按照写“正”或“++++”的次第进行记载，共计数100个WBC。
4．计算出种种白细胞所占比值，以百分譬如式讲述。（如：N 70% 讲述为0.70）
5．种种白细胞所占百分率，乘以白细胞总和，即可求得每升血液中种种白细胞数量的统统值。
（三）留隐衷项
1.如发现中性粒细胞有核左移或核右移，应分类计数干状核与分叶核或﹥3分叶核的粒细胞。
2.如血片中发现稚童细胞或颠倒WBC时，应分类漂荡，并包括在分类的百分比中。
3.如发现存核红细胞时，应一一计数但不计入100个WBC内，以分类100个WBC见到幼红细胞若干个来讲述，并应注明其所属阶段
4.WBC在(3.0～15.0)×109／L之间者，分类计数100个WBC；WBC在15.0×109/L以上时，应计数200个WBC，低于3.0×109/L时，则应选用2张血涂片计数50～100个WBC。
5.分类中还应防范不雅察教育红细胞和血小板的形态、染色偏激分散情况，防范有无寄生虫(如疟原虫)偏激他颠倒所见。
实验五 血小板计数、嗜酸性粒细胞计数（示教）
【办法要求】
1、掌捏血小板计数的旨趣、次第、计算、参考鸿沟、留隐衷项；
2、了解血小板计数的临床料想；
3、掌捏嗜酸性粒细胞计数的旨趣、次第、计算、参考鸿沟、留隐衷项；
4、了解嗜酸性粒细胞计数的临床料想。
5、老到毛细血管采血
一、血小板计数 (目视法〉
【旨趣】全血作熔解(或不熔解)红细胞但仍能保存血小板完好意思形态的稀释液稀释后 ， 充入血细胞计数盘中，然后于显微镜下进举止直计数，以求得单元体积内的血小板数
【器材】显微镜、改良Neubauer计数板、试管、吸管、微量吸管
【试剂】血小板稀释液:复方尿素稀释液
【标本】末梢血
【操作】
1. 准确吸取稀释液 0.38 ml，置于清洁小试管中。
2. 先让手指暖和充血，成例消毒皮肤，待于后深刺无名指，让血液当然流出，擦去第一滴血。
3. 用巳校准过的血红卵白吸管一次性准确采血20ul擦净管外血液，轻轻将血加入上述试管底部，并用上清液反复洗吸管三次，立即充分混匀，待完全溶血后再次混匀1min.
4. 取上述均匀的血小板悬液1滴，注入计数池内，静置 10-15min，使血小板下千里。
5. 先在低倍镜下找到中央大方格，再换高倍镜准确鉴别，精准计数中央1个大方格（即400 个小方格〉内血小板。
6.计算： 血小板数/升 =1个大方格内所数得血小板数×10×20×106
=1 个大方格内血小板数×0.2×109/L
【终结讲述】 PLT=XXX×109/L
【参考鸿沟】〈 100-300 〉X109/l
二、嗜酸性粒细胞径直计数
【旨趣】要求嗜酸性粒细胞径直计数的稀释液能阻碍红细胞和大部分其他白细胞，同期能使嗜酸性粒细胞着色。本实验先容两种稀释液：溴甲酚紫稀释液和丙酮一伊红稀释液〈Dunger氏稀释液)。因嗜酸性粒细胞的颗粒为非水溶性颗粒，是以在两种稀释液中均不被熔解，溴甲酚紫为诱骗剂，变色鸿沟为PH5.2－6.8（黄－紫），嗜酸性颗粒在本稀释液中呈现紫兰色，而在丙酮一伊红稀释液则染成红色。取未稍血于稀释液内，然后滴入血细胞计数盘，在显微镜下进行计数。
【器材】显微镜、改良Neubauer计数板、试管、吸管、微量吸管
【试剂】嗜酸性粒细胞稀释液：丙酮一伊红稀释液
【标本】末梢血
【操作】
操作按白细胞计数量视法进行，简述如下：
1.取手指血20ul于已盛有0.38ml稀释液的试管中，立即混匀。
2.待稀释液澄清（或基本澄清)后，取小数充于计数盘两侧的计数池内， 置5分钟傍边.在低倍镜下计数两侧中央和四角共十个大方格内的嗜酸性位细胞数。（必要时用高倍镜）
在稀释液中，红细胞已一起被熔解，其他白细胞也基本上被熔解.嗜酸性细胞颗粒在溴甲酚紫液中着兰紫色，在丙酮-伊红液中则染成鲜红色，少数残留的中性粒细胞不着色或着色隐微.如有可疑，可转念高倍镜识别.
3.计算
嗜酸性粒细胞/L＝N×106×20＝N×20 x109
103
式中N轨则鸿沟内数得的嗜酸性粒细胞 .
【终结讲述】 Ec=X.XX×109/L
【参考鸿沟】
（O.05－0.5 ）× 10/L
【次第学评价 】
嗜酸性粒细胞径直计数稀释液配制次第许多，其基本要求是能熔解红细胞和大多数白细胞，而嗜酸性颗粒能昭着着色。一般选定诱骗剂法和特异性染料着色法 ， 本实验先容的两种稀释液即分别属于这两种次第 ， 前者因选定策动剂 ， 是以器材均应保持中性 ， 不然影响计数终结，后者因丙酮容易蒸发，以清新配制为宜 ，在4℃保存时代亦不行过长，是为不足之处，且颗粒着色也不如在澳甲盼紫中着色昭着易辨 .
三、留隐衷项
1. 充池前应将红细胞悬液充分混匀。
2. 试管、吸管和计数盘均应无酸、碱或浓重，不然可引起溶血或气泡。
3. 如采血速渡过慢 ，血内有凝块 ， 则应重取。
4. 计数池内不应有气泡或稀释液外溢中意，如发生上述情况，须再行充池计数。
5. 一升引具和稀释液要极度清洁，退避稀释液或试管中的渺小颗粒，微生物等被误以为血小板或血小板齐集而搅扰计数 .
6. 血小板容易齐集，在滴入计数室前必须充分摇匀，但摇匀时勿用劲太大，以防阻碍血小板。
7. 如血液稀释后溶血不完全，可在每 l00ml 复方尿素稀释液中补加尿素 2-4g。
8. 一定要待血小板完全下千里后再计数，计数时可调遣光学显微镜的旋钮，仔细鉴别。
9. 如用复方尿素稀释液，应在血液稀释后1小时内计数终结，如用草酸铵液则可在2小时内数完。如舍弃时代越长，血小板可能越低，在夏令要防范不使液体蒸发，不然血小板失去光泽，不易鉴别。
10.为了减少血小板齐集或阻碍，应将试管、吸管和打针器硅化后取静脉血计数。
11. 如取血标本同期作白细胞和血小板计数时，针刺应稍深，使血流畅通，拭去第一滴血后，领先采血作血小板测定，操作应迅速，退避血小板齐集和阻碍，选定标本后尽快计数，以免影响终结。
12.血液与稀释液宣战后，应在半小时内计数终结，不然嗜酸性粒细胞亦逐渐破灭，使终结偏低。
13.在混匀血液稀释液时，用劲不行过大，以免嗜酸性粒细胞破灭。
14.器材必须严格即吸管、试管、计数盘和盖玻片均应干净，洗涤干燥后使用，如溴甲酚紫稀释液滴加于试管内立即变色，应更换并检查原因。
15. 由于正常东说念主嗜酸性粒细胞白日较夜间低，上昼比下昼波动大，同期受许多生理因素影响，如作动态不雅察，应固定每天选定标本的时代。
实验六毛细血管采血，RBC计数，HB测定，红细胞形态检查
【办法要求】
1、掌捏红细胞计数的旨趣、次第、计算、参考鸿沟、留隐衷项；
2、掌捏正常和颠倒红细胞的形态特色及检查次第。
3、老到红细胞计数的临床料想。
4、老到氰化高铁血红卵白(HiCN)测定次第和法式弧线的制备。
5、老到血红卵白测定的临床料想。
一、HB测定
【器材】
分光光度计〈或 58 〉G型光电比色计、一次性血红卵白吸管、一次性采血针、大试管、无菌干棉球和 75% 酒精棉球
【试剂】
一、血红卵白篡改液
Vankampen-Zijlstra 〈文王人氏〉液
K3Fe(CN)6 200mg kCN 5Omg
kH2P04 140mg TritonX-100 1ml
蒸馏水 加至 1000m1
配成的试剂用滤纸过滤后，应为淡黄色透明溶液，置棕色瓶中室温保存备用。
二、 HiCN 参考液
【次第】
氰化高铁血红卵白〈 HiCN 〉测定法
【旨趣】
血液在血红卵白篡改液中溶血后，除SHb 外各式血红卵白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红卵白〈 Hi 〉，再与 CN- 勾搭生成踏实的棕红色氰化高铁血红卵白〈 HiCN 〉。
HiCN最大领受波峰为540nm，波谷为 504nm，在特定法式条目下，毫摩尔消光系数为44。因此把柄待测标本的吸光度，即可求得血红卵白浓度也(g/l)。
在莫得相宜法式分光光度计的情况下，亦可用 HiCN 参考液制备法式弧线，或求出换算常数〈 K 值〉，波折计算出血红卵白浓度。
【操作】
1.绘制 HiCN 的法式弧线
取血红卵白参考液，表6为例。
表6 HiCN 参考浓度与吸光值〈例如〉
按照表6的数值，以浓度为横坐标，以A值为纵坐标绘画，得一个直线法式弧线.或按下式求出K值。
2. 测定血红卵白
(l).取手指血20μl，加到5.Oml血红卵白篡改液内，混匀，静置5分钟。
(2).用分光光度计(或 581G 型光电比色计绿色滤光板)，光径 lcm，以蒸馏水或篡改液作空缺调零，测定吸光值"A"，然后在法式弧线上查出相应的浓度，或A×K值算出血红卵白浓度:
入540
Hb(g/l)=A HiCN×64458×251=A×367.7
44 1000
入540
式中:A：测定管吸光值 64458：Hb分子量
HiCN
64458/1000 lmol/L Hb 溶液中含Hb克数 251血液稀释倍数
【参考鸿沟】
男:120-160g/l
女:110-150g/l
更生儿:170-200g/l
【留隐衷项】
1.血红卵白篡改液中，KCN 为剧毒药品，固然浓度较低，但在配制时和保存过程中必须升迁警惕，退避浑浊，严禁口吸篡改液，
2.比色后废液可按每升加次氯酸钠液〈即安替福民〉约 35ml 混匀，掀开过液，待(CN-)氧化成 CO2和N2蒸发后，再排入下水说念。
3.血红卵白篡改液不行贮存在塑料瓶中，不然(CN)- 下落，使终结偏低 .
4.对分光光度计的波长、光缝、杂光和比色杯光径，均应校正。
5.法式弧线或K值应如期检查、校正。
6.下列因素可引起血红卵白假性增高:脂血症，血液浓缩，白细胞 >300OO/ul，儿童症黄症，严重的血管内溶血等。
【次第学评价】
1.HiCN 法操作方便，终结较踏实可靠，为当今公认的测定Hb 的参考次第.但其致命流毒是 KCN剧毒，使用或治理不当可形成严重公害。高白细胞和高球卵白血症可致混浊，此外，HbCO 篡改较慢的问题也未完全处理。
2.测定 Hb 还可用十二烷基硫酸钠( SDS )法，其凸起优点是无用剧毒药品，但SDS自身质料互异较大，而况SDS-Hb消光系数和法式液尚待商议。当今还有使用碱化血红索 D575 法者，终结亦甚平静。
3.HiCN 的三种试剂中:文王人氏液的 pH 为 7.2 士 0.2， 血红卵白在其中篡改较快，5 分钟内即可完成。而况加入了非离子名义活性剂，能较好地退避混浊，因而是常用的篡改液.都氏液体pH偏高( 8.6 )，血红卵白完全篡改需40分钟，并可产生混浊，是以少用。松原氏液，加入了 NaCl，以增强名义活性剂作用，即可加快溶血，还可退避混浊，但在我国少用。
4.本次实验操作功令 '
吸取氰化高铁血红卵白篡改液 5ml →吸 HiCN 参考液于篡改液中混匀→采末稍血与篡改液中混匀→测HiCN参考液的吸光度→计算 K值→测待测 Hb 的吸光度→计算Hb 终结→绘制 HiCN 法式弧线。
5.示教：正常及颠倒 RBC 形态
二、红细胞计数
【器材】 光学显徽镜、一次性 Hb 吸管、血细胞汁数盘、小试管
【试剂】
甲醛-枸橼酸盐钠溶液
为当今红细胞目视计数法最好稀释液
枸橼酸三纳 3.0g 抗凝和保持等渗
福尔马林 lml 抗凝和保持等渗
溶于 10Oml 蒸馏水中
【次第】 红细胞计数〈目视法〉
【旨趣】
用等渗溶液将定量血液稀释到一定倍数〈以达到在计数盘上恰能分清单个红细胞为度〉，滴入血细胞计数池，在高倍镜下计数一定体织的红细胞，把柄计数盘的结构旨趣和稀释倍数，换算成为每升血液中的红细胞数.
【操作】
1.取干燥大试管一只，准确加入红细胞稀释液 2ml
2．按“白细胞计数”采血次第，准确取血10μ1，浅近放入大试管内混匀，其余操作均与“白细胞计数”目视法换取。
3.将计数盘平放在显微镜的载物台上，用低倍镜找出中央红细胞计数区域。重用高倍镜计数中央大方格中的四个角上和中心的五个中方格内 RBC。
4、计整个数区域RBC的数量
5、计算
红细胞数/L=（N/5）×25×10×103×200
=N×1010=N/100×1012
式中:N 五个中方格内数得的红细胞数 .
×25/5将五个中方格内红细胞数换算为一大方格内红细胞数
×10 1微升稀释血液内红细跑数
×106换算为“/L”
×200为血液稀释倍数（严格的说为201倍）
【参考鸿沟】
男：（4.0-5.5）×1012/L
女：（3.5-5.0）×1012/L
更生儿：（6.0-7.0）×1012/L
【质料探员】
1. 变异百分数评价法
本法适用于 30 东说念主以上集体探员。次第和评价见“白细胞计数“
2. 两差比值评价法
本法适用于个东说念主探员。次第和评价见“白细胞计数”。
【留隐衷项】：见实验一红细胞计数
1、采血严格按末梢采血要求作念。
2、计数按压线和“弓”字要求作念。
3、稀释液要过滤、计数板要清洁干燥。
4、如无RBC稀释液，可用清新等渗盐水。
5、充池后若每个中方格之间进出杰出20个以上时应再行充池。
三、红细胞形态检查
² 小红细胞：小于6um，指示血红卵白生成障碍，见于缺铁性贫血，珠卵白生成障碍性贫血，球形红细胞增多症
² 大红细胞：大于10um，为未完全教育的红细胞，见于巨幼贫，溶贫
² 巨红细胞：大于15um，巨幼贫
² 红细胞大小不均：直径进出一倍以上，见于严重的增素性贫血，巨幼贫
ü 严容素：淡红色圆盘状，中央有生感性浅染区，见于急性失血，再障，白血病
ü 低色素：中央浅染区扩大，致使成环形红细胞，见于缺铁性贫血，珠卵白生成障碍性贫血，铁粒幼细胞性贫血。
ü 高色素：染色深，浅染区隐藏，巨幼贫
ü 多色性：刚脱核，含RNA，指示骨髓红细胞功能活跃，见于溶血或急性失血性贫血。
Ø 球形：红细胞膜弱势引起的溶血性贫血，中心着色深浓，体积小，有球形之立体感。红细胞骨架卵白、收缩卵白弱势，不行保持正常形态、脆性和可塑性，气体交换功能较正常弱，易阻碍、熔解。
Ø 卵形：红细胞膜骨架系统弱势性疾病，卵形、杆形，两头钝圆，长轴增大，短轴裁减。红细胞功能颠倒，脆性加多
Ø 靶形：血红卵白化学成份发生变异，糊口时代仅为正常的一半，见于珠卵白生成障碍性贫血，
Ø 口形：中心煞白区呈扁平状，膜颠倒，脆性加多，糊口时代裁减。
Ø 镰形：含HbS，在缺氧情况下，熔解度指责，形成长形或尖形结晶体，使膜发生变形，引起溶血，主要见于玄色东说念主种
Ø 棘形：突起间距不功令，见于β脂卵白枯竭症。
Ø 巨幼细胞性贫血：DNA合成障碍，导致骨髓及外周血红细胞、白细胞、巨核细胞系颠倒改变，细胞核与质发育不服衡，核过期于质，可发展周至血细胞减少大细胞严容素性贫血。
四、红细胞平均指数
实验七 静脉采血，HCT，ESR，RBC三个平均值的测定
【办法要求】
1、掌捏静脉采血(collection of venous blood)的次第和无菌操作技能；
2、 掌捏红细胞比积测定旨趣、次第；
3、掌捏红细胞三个平均值的计算；
4、老到红细胞比积测定和红细胞三个平均值的临床料想；
5、熟练红细胞千里降率的测定的理、次第、留隐衷项；
6、老到红细胞千里降率的临床料想；
7、了解静脉血测定血细胞参数有何优瑕玷。
一、静脉抽血：
【器材】 一次性消毒打针器、压脉带、垫枕、试管
【试剂】 30g/L碘酊、75%（V/V）酒精、抗凝剂（109mmol/L枸橼酸钠）
【旨趣】打针器刺入浅静脉后，负压吸取所需血量。
【操作】
1）准备抗凝管 取试管一支加抗凝剂（109mmol/L枸橼酸钠）0.4ml。
2）检查打针器 左手持针头下座，右手持针筒，使之细巧领略，（针头斜面临准针筒刻度）抽拉针栓检查有无阻拦、漏气、排尽空气，待用。
3）选拔静脉 前臂水平伸直置于桌面枕垫上，表示穿刺部位，选拔肘前静脉。
4）消毒 先用30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从内向外顺时针标的消毒皮肤，待碘酊蒸发后，再用75%酒精棉签同法拭去碘酊，待干。
5）扎压脉带 采血部位上端扎带（切勿浑浊消毒部位）
嘱患者反复捏拳数次后紧捏拳头，使静脉充盈，便于穿刺。
【留隐衷项】
1）抽血时针栓只可向外抽，切勿向静脉内推，以免注入空气形成气体栓塞，形成严重成果。
2）血液加入抗凝管中后应充分混匀。
3）采血后应立即送检。
二、红细胞千里降率测定
【器材】Westergren 血千里管、血千里架、 试管、吸管
【试剂】 109mmol/L枸橼酸钠溶液：枸橼酸钠（Na3C6H5O7。2H2O）32g，溶于蒸馏水1000ml中。
【标本】 清新全血。
【旨趣】用一定量的枸橼酸钠抗凝血置于特制血千里管中，耸立于特制血千里架上，1h后读取红细胞下千里后血浆的高度。
【操作】
1、加抗凝剂 准确吸取109mmol/L枸橼酸钠溶液0.4ml于清洁试管中。
2、采血 准确选定1.6ml，加入抗凝管中立即混匀。
3、装血千里管 用血千里管吸入混匀的全血至刻度“0”处，拭去余血。
4、立血千里管 将血千里管耸立于血千里架上。
5、读数 1h末准确读取红细胞下千里后的血浆高度，即为红细胞千里降率。
【留隐衷项】
1、使用分析纯（AR）枸橼酸钠（Na3C6H5O7。2H2O），配制浓度应准确、液体无千里淀、浑浊，保存期2周。
2、限定抗凝剂与血液比例为1：4。
3、血千里管内径要法式（2.5mm），舍弃要垂直，不可歪斜。
4、幸免径直光照、移动、振动。
5、最宜温度18~25℃，采血后2h内完成。
6、在千里降过程中红细胞千里降率并不是等速下落，因此毫不可只不雅察30min然后乘以2当作1h血千里终结。
【参考鸿沟】
⑴＜50岁： 男0~15mm 女0~20mm/h
⑵＞50岁： 男0~20mm/h 女0~30mm/h
⑶＞85岁： 男0~30mm/h 女0~42mm/h
⑷儿 童： 0~10mm/h
三、红细胞比容测定
【试剂】 Wintrobe管、细长毛细滴管、离心计。
【试剂】 EDTA-K2分装小试管并干燥 （可抗凝2ml血液）。
【标本】 静脉血。
【旨趣】 用一定量的抗凝血加于温氏管中，经一定的速率时代离心后，读取压实红细胞层占全血体积的比值。
【操作】
1、采血 静脉采血2ml加入抗凝管中立即混匀。
2、加标本 用细长毛细滴管加入温氏管刻度“10”处（幸免气泡）塞紧管口。
3、离心 水平离心计2264g（3000转/分30min，读取压实RBC层柱高mm数，再相似速率离心10min，至RBC 层不再下落为止。
4、不雅察终结 离心后血液从上至下分为血浆层、PLT层、WBC层和有核RBC层、复兴RBC层（紫黑红色）、带氧RBC层。读取RBC层柱高（以紫黑红色层RBC名义为准）的mm数，乘以0.01，即为每升血液中RBC体积的升数。【留隐衷项】
1、退避血液淤积、浓缩、溶血。
2、表层血浆如有黄疸、溶血应注明，供临床医师参考。
3、离心时代与速率要表率化，不然不宜用于计算MCV、MCHC。
4、本终结主要受RBC数量或血浆容量的影响。
【参考鸿沟】
男性：0.40~0.54 女性：0.37~0.47
四、红细胞三个平均值的测定
【界说】
1、RBC平均容积（MCV）：指每个RBC平均体积的大小，以（fl）为单元；
2、RBC平均血红卵白含量（MCH）： 指每个RBC内平均所含血红卵白的量，以（pg）为单元；
3、 RBC平均血红卵白浓度（MCHC）：指平均每升RBC中所含血红卵白浓度，以（g/L）为单元。
【计算】
对团结抗凝血标本同期计数RBC、测定Hb和Hct，由此可计算出红细胞三个平均指数。
每升血液中RBC体积（Hct）⑴MCV=------------------------------------- 每升血液中RBC个数（RBC）
每升血液中血红卵白含量（Hgb）⑵ MCH=------------------------------------------ 每升血液中RBC个数（RBC） 每升血液中血红卵白含量（Hgb）
⑶MCHC=------------------------------------------ 每升血液中RBC压积（Hct）
【参考鸿沟】
MCV 80----100fl
MCH 27----34pg
MCHC320----360g/L
实验八 临床历练仪器参不雅、网织红细胞的活体染色技能及形态示教
【办法要求】
1、熟练网织红细胞活体染色和制片技能；
2、掌捏网织红细胞活体染色后的的形态特色；
3、老到网织红细胞临床料想；
4、了解五分类血细胞分析、干化学尿液分析仪、尿千里渣自动分析仪等当代历练仪器在临床的应用。
5、了解临床历练的仪器职责经由及临床历练的仪器使用与爱护情况。
6、了解病院LIS（Laboratory Information System）系统的临床应用
一、网织红细胞计数
【器材】
光学显微镜、一次性采血针、小试管、载玻片、推玻片、Miller 窥盘、一次性 Hb 吸管
【试剂】煌焦油蓝生理盐水溶液
煌焦油蓝 1.0g
枸橼酸钠 0.4g
混匀，熔解后加生理盐水至 l00ml，过滤后贮存于棕色瓶中备用。
【旨趣】
网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全教育红细胞的过渡型细胞。由于其胞浆中尚残存着数量不等的嗜碱性物资 RNA， 经煌焦油蓝活体染色法染色后，可见有蓝色的点状 ， 线状或网絮状结构.其网线状物资跟着细胞的教育而逐渐减少以至隐藏。
【操作】
1.百分计数
①于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝-中性红染液。
②加入末稍血2滴（煌焦油蓝–中性红液加血1滴)于上述试管中，混匀。
③静置，15-2Omin(煌焦油蓝一中性红液是静置37度孵育15min)后，取1滴制成薄片.
④干后，低倍镜下选拔细胞分散均匀，着色清澈部分，在油镜下不雅察并计数 l000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或统统值讲述。
⑤ 统统值计算
网织红细胞数 /ul=网织红细胞%×红细胞数/ul
100
【留隐衷项】
① 活体染色时代不行过短，室温低时，放37℃温箱
② 最好制片2张，每张计数500个红细胞，幸免分散不均引起的瑕玷，涂片要薄而均匀，不使红细胞重复
③ 如计数方便，可于目镜中放一中间有孔硬纸片，缩小视线，便于计数
④ 试剂应如期重配，以免变质千里淀
⑤ 用瑞氏一姬姆萨染液复染后可使网织忽细胞计数终结减少
⑥ 因操作瑕玷大，不宜用玻片径直染色
⑦ 网织红细胞也可用荧光染色或流式细胞仪计数 .
【参考鸿沟】
成东说念主 0.5%-1.5%
更生儿 3%-6%
统统值:(24-84)×109/L
2.Miller 窥盘计数法
为了升迁计数网织红细胞的精度和速率，ICSH推选使用Miller窥盘，该窥盘为一厚1mm、直径19mm有圆形玻片，玻片上以渺小刻线差异红大小两个正方形，A 为小正方形，B为大正方形，A位于B之内，其中A的边长为B边长的1/3，故其面积为1/9，应用时将 Miller窥盘置于目镜内检测涂片，用小正方形计数红细胞，大正方形计数网织红细胞数，再接下式计算:
网织红细胞 %=B格内网织红细胞 ×100%
A格内红细胞数×9
为了限定CV在10%之内，要求在一语气视线中小方格内需要计数的红细胞见表
【讲述方式 】
除讲述相对值(%)外，还应讲述网织红细跑统统值(个 /L)
3. 网织红细胞生成(教育)指数(Reticulocyte productionindex，RPI)：
有东说念主以为仅用网织红细胞相对值或统统值抒发还不够真正。其贫血时骨髓生成红细胞增多，大批尚未教育红细胞开释入血，而这些网织红细胞在外周教育时代需2天，而正常生理情况下骨髓开释到外周的网织红细胞仅一天后其胞质中 RNA即隐藏。为此 Finch 提议在贫血时用RPI讲述，它代表网织红细胞的生成相当于正常东说念主的若干倍。
RPI=网织红细胞相对值(%)×病东说念主红细胞比积
2 45%
“2”为网织红细胞教育时代(天)，又称补正系数， “45”正常东说念主红细胞比积 (% 〉
网织红细胞生成指数的补正系数
二、附院临检科参不雅
【场所】
临检科入院部实验室
【仪器】
1. Bayer ADVIA 120血细胞分析仪
2. SYSMEX T1800i血细胞分析仪
3. 迈瑞BC2800血细胞分析仪
4. SYSMEXUF100全自动尿千里渣分析仪
5. Diasys2003R/S尿千里渣职责站
一、血细胞分析仪
50年代初期，好意思国库尔特利用电阻抗旨趣，遐想了血细胞计数仪，使细胞的计数精密度比东说念主工血细胞计数法升迁3—5倍，幸免了坚苦的办法计数，首创了血细胞分析的新纪元。
70年代以后，由于计算机技能的飞快发展，血细胞分析仪证据也很快。不仅血细胞分析仪测量终结的精准性、准确性不休升迁，而况检测的参数也逐渐增多，使得医学历练的水平不休升迁，为临床提供了更多的有效的实验策动，关于某些疾病的会诊与诊疗具有关键的临床料想。另外，仪器还可将RBC、WBC、PLT的分散直方图打印出来，这对正确地分析检测终结及报警原因提供了有效的信息。
比年来，跟着各式高新技能在血细胞分析的应用，血细胞分析仪的检测旨趣不休完善，检测水平不休升迁，各式型号的仪器接踵问世。
这些仪器主要创新为多项技能和洽同期检测一个细胞，抽象分析实验数据，得出较为准确的RBC、WBC、PLT、DC、Retic等各项参数终结。
（一）五分类仪白细胞分析旨趣
1. 容量、电导、光散射(VCS) 法
2. 阻抗与射频技能和洽白细胞分类法
3. 光散射与细胞化学技能和洽应用
4. 多角度激光法白细胞分类法
（二）过氧化物酶染色分析基础
在五种WBC中，有过氧化物酶活性的细胞按其活性强度瓜代为E、N、M，而L和B均无此酶。
将血液经过氧化物酶染色后，胞浆内即可出现不同的酶化学反应，由此组成了此种血液分析仪的分析基础。
检测的第一步
血液在仪器内通过分血器插足WBC测试系统，
第一步：将血液加入到含有清洗剂和甲醛的高渗液体内(21倍稀释)并孵育
(40～70℃)20s；
清洗剂：含有非离子名义活性剂，使RBC阻碍
甲 醛：使WBC胞质内酶被固定
检测的第二步
发生反应后，即加入过氧化氢(H202)和1-氯-1-萘酚，并加热13s
此时，如果待测细胞质中含有过氧化物酶， 即可剖析H202产生[O]，后者可使1-氯-1-萘酚显色，并千里积定位于酶反应部位。
检测的第三步
染色后的WBC在通过测试区时，由于酶反应强度不同(阴性、弱阳性、强阳性)和细胞体积大小不同，激光束射到细胞上的前向角(透过光）和散射角（散射光）有所不同;
检测的第四步
以X轴为吸光率(酶反应强度)，Y轴为光散射(细胞大小)，每个细胞产生两个信号勾搭定位在细胞图上。
仪器每秒钟可测上千个细胞．计算机对存储的尊府进行分析处理，并勾搭嗜碱细胞／分叶核通说念终结计算出白细胞总和和分类计数终结。
（三）嗜碱性粒细胞测量通说念
是用于Baso计数和Neut核分叶进程的分析，分析过程中利用“时代差“与RBC／PLT检测使用共同的检测通说念。
当血液插足Baso测量通说念时，血液与酸性名义活性剂反应，RBC被熔解．除Baso外(因Baso有违背活性剂的化学作用) ，其它通盘WBC膜均被阻碍，胞浆溢出，仅剩裸核。
Baso与其它裸核细胞流入RBC检测系统时，被激光照耀后的细胞产生的前向角和散射角变化，产生了二维细胞图。
完好意思的Baso呈高狭角散射，定位于图的上半部；
裸核位于下半部；
不同的裸核结构不同：如：淋巴细胞、稚童细胞为圆形，中性分叶核有2叶～5叶及更多叶，在X轴单个核位于左边，分叶越多越靠右边；
计算机把柄分叶核/单个核的比例计算出左移指数(1eft index，LI) 。LI越强，讲明核左移越昭着。
白血病细胞夸耀在X轴的左侧。
二、尿千里渣自动分析仪
选定计算机技能、电子技能或高技术光学技能勾搭显微镜或专用开导对尿液中的细胞、管型、结晶、寄生虫、细菌等有形因素进行识别、计数。
（一）镜检法的瑕玷
1. 费时坚苦
2. 重复性差
3. 不同历练东说念主员间的互异大
4. 实验室间终结不具可比性
5. 难以法式化
（二）尿千里渣检查的证据
（1）利用干化学法检测尿中白细胞、红细胞；
（2）利用图象照相系统摄制尿千里渣因素的静止图象，对尿千里渣因素进行自动分类、计算及储存等，形成尿千里渣分析职责站。
（3）利用流式细胞术勾搭电阻抗旨趣检测尿中因素进行定量分析的全自动尿千里渣分析仪。
（4）选定干涉、进出、偏振光、扫描及透射电镜等不雅察。
（5）选定尿千里渣活体染色及细胞化学等多染色法来识别各式细胞和管型。
（6）应用单克隆抗体技能识别各式细胞因素。
1988年：好意思国－“yellow IRIS”高速照相机式的尿千里渣自动分析仪，简称Y-1尿自动分析仪。
1990年：对原有的尿千里渣分析仪进行创新，分娩出影像流式细胞庆典的UA-1000型和UA-2000型尿千里渣自动分析仪。
1995年：日本东亚公司将流式细胞和电阻抗技能勾搭起来，分娩出新一代的UF-100（fully automated urine cell analyzer）型尿千里渣自动分析仪。
1998年：好意思国DiaSys公司分娩了一种尿千里渣显微镜检查的自动进样装配，它主要由R/S1000主机、清洗箱、自动吸样器、用于光学显微镜不雅察的涂片汇注器等组成，把尿千里渣标本自动吸取到显微镜下的流动计数池进行定量的作用。
（三）UF-100分析旨趣
1、稀释、染色的标本通过鞘液池
尿液标本被稀释液稀释和染液染色后，靠液压作用通过鞘液流动室，当反应样品从喷嘴出口插足鞘液流动室时，它被鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的体式通过流动池的中心(竖直)轴线。
2、氩激光照耀
荧光强度(FL） 染色尿液因素发出的荧光主要反应细胞的定量性情；
散射光强度(Fsc） 仪器测定的前向角散射光成比例的反应细胞的大小；
电阻抗的大小电阻抗电信号主要与细胞的体积成正比。
3、测定荧光、散射光和电阻抗
将荧光、散射光和电阻抗的信号篡改成电信号，分析这些电信号，得到每个尿液标本产生的直方图和散射图，分析这些图形，即可区别出每个细胞。
（四）检测参数及临床应用
UF-100型全自动尿千里渣分析仪汇注标实质积为9ml，自动进样模式所需标实质积不少于4 ml，执行吸取标实质积为0.8ml，检测标实质积为40.0微升，每小时可检测100个尿标本，可讲述以下参数：
定量参数：RBC、 WBC、细菌、上皮细胞、管型
指示参数：病理管型、结晶、小园细胞、精子、酵母菌
附加信息：红细胞形态学、导电率
（五）好意思国DiaSysR/S2003尿千里渣职责站
尿液分析仪对尿样进行干化学分析，尿干化学分析的终结传送到计算机中。再对离心后的尿千里渣用显微镜进行检查，显微镜的图像传送到计算机中，在屏幕上夸耀出来。
（六）尿千里渣分析仪与显微镜检查
1. 影像式尿千里渣分析仪：
经过严格的定时、定速离心，留取定量的尿千里渣，以法式单元定量讲述，因此同手工显微镜次第比拟，它的分析法式定量、视线清澈、精准度较高，但许多法子仍需东说念主为操作，故仍可能存在东说念主为瑕玷。
2. 流式细胞术尿千里渣分析仪优点：
[1] 尿液不需离心，标本用量少；
[2] 检测速率快，每小时可检测100个尿液标本；
[3] 每一标本检测法子模式一致，易于质料限定和法式化，因而检测精准度较高。
[4] 尿液干化学隐血历练终结和尿液千里渣分析仪红细胞计数的合营能判断出血状态等。
3. 流式细胞术尿千里渣分析仪瑕玷：
[1] 尿千里渣自动分析仪不行检出滴虫、脂肪滴或药物、结晶等，
[2] 不行鉴别颠倒细胞，大批细菌、酵母菌还会搅扰计数，对影红细胞容易漏诊；
[3] 不行明确病感性管型的分类。
实验九 血成例抽象性实验（3学时）
【办法要求】
1、白细胞计数“变异百分率评价”次第。
2、要求在两小时内完成血成例的检测，检测内容包括：白细胞计数、血红卵白测定、白细胞分类计数。
【旨趣】用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同期阻碍熔解红细胞，而白细胞中核卵白被其凝固变性，仍保留其形态。结晶紫可使白细胞隐微着色而便于识别。将稀释的血液注入血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。
【器材】
显微镜、改良Neubauer计数板、试管、吸管、微量吸管
【试剂】白细胞稀释液：2%冰乙酸溶液中加东说念主10g／L结晶紫（或亚甲蓝）3滴。
【标本】清新全血或末梢血
【操作】
1.加稀释液:用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。
2.吸取血液:用微量吸管吸取清新全血或末梢血20μl，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取表层白细胞稀释液清洗吸管2～3次。
3.混匀： 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。
4.充池：再次将小试管中的细胞悬液混匀。用一次性Hb吸管吸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2～3min，待白细胞完全下千里。
5.计数： 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总和，并记载数据。
6.计算:WBC=[(四个大方格内WBC总和N)/4]×10×20×106＝（N/20）×109/L
7.用计算的终结与仪器法所测终结比较。
【终结讲述】：
WBC=X.X×109/L
【留隐衷项】
1.稀释用的吸管、微量吸血管、血细胞计数板均为计量器用，使用前需经过严格的校正，不然将径直影响计数终结的准确。
2.使用标本可为由静脉穿刺选定的清新全血，也可为静脉末梢血。汇注末梢血时，应防范采血部位不得有冻疮、水肿、发绀、炎症等，以免标本失去代表性；同期也应防范不行过度挤压，以免组织液混东说念主引起血液凝固或形成计数终结不准确。
3.充池时，如充液不足、液体外溢、断续充液，或产不满泡、充液后移动盖玻片等，均会使细胞分散不均匀，形成计数终结不准确。
4.计数池内的细胞分散应均匀，一般情况下各大方格间的细胞数进出不杰出10％。若进出太大，应再行充池。
5.计数方格内的压线细胞时，治服数上不数下、数左不数右的原则。
6.白细胞数量过多时，可选定加大稀释倍数的次第。如20μl血加入到0.78ml稀释液中或10μl血加入到0.38ml稀释液中。
7.白细胞数量过少时，可选定扩大计数域的次第，计数8个或9个大方格；也可选定减少稀释倍数的次第。
8.白细胞稀释液不行阻碍有核红细胞，它可使白细胞计数终结偏高，此时应计算白细胞校赶巧。
【次第学评价】
手工法
优点：方便易行、不需粗鲁仪器，可用于血液分析仪器的校准
telegram 偷拍
瑕玷：精密度和重复性欠佳
仪器
优点：精密度和准确性较高、易于法式化、恰当大限制健康东说念主群普查
瑕玷：仪器粗鲁、某些东说念主为或病理情况（有核RBC、大PLT等）可搅扰计数。
【参考鸿沟】
成东说念主 (4-10)× 109/L
更生儿〈 15－20 〉× 109/L
6 月-2 岁(11-12 )× 109/L
【五】 质料探员
1. 集体探员 变异百分率评价法 :V=Xm-X×100
Xm
式中V 变异百分率
Xm 靶值：团结样品多东说念主（30 东说念主以上）计数的均值。
X ：被探员者的讲述值。
计分 ：质料得分 =100-V×2
评价 ： 90－100 分为 A 级（优） 80－89 分为 B 级（良）
70－79 分为 C 级（中） 60－69 分为 D 级（合格）
＜60 分者为 E 级（不足格）
本法适用于东说念主数较多（如 30 东说念主以上）的技能探员，或市、区集体探员。
2. 个东说念主技能探员 两差比值译价法：“两差比值”即团结标本或团结病东说念主在短时代内两次细胞计数之差与两次细胞计数的法式差之比。
两差比值＝(X1-X2)/X1+X2
式中， Xl，X2分别为第一、二次所得细胞数。
质料得分=100-(两差比值×20.1)
把柄统计学表面两差比值＞1.99， 则两次终结有显耀性互异，故失分系数为 40/1.99=20.1
评价法式同异百分率评价法
3. 成例探员法式（routine checkingstandard 简称 RCS）法：本法适用于个东说念主探员
RCS=四大格所见白细胞最大值一最小值×100%
四大格所见自细胞平均值
评价：
WBC≤4×109/L，RCS＜30% 合格
WBC（4.1-14.9）×109/L，RCS＜20%合格
WBC≥15×109/L者，RCS＜15%合格
杰出以上法式为分歧格
【次第评价】
自视法技能瑕玷主要开始(1)器材不准确、不干净。(2)采血、稀释和夹杂标本不当。(3)充池装假和计算不准。
另外还有固有瑕玷。该瑕玷可因计数数量加多而减少
实验十 尿液千里渣检查
【办法要求】
1、掌捏尿液中各式细胞、管型和结晶的形态特征。
2、掌捏尿千里渣镜检的法式化操作。
3、老到尿千里渣历练的临床应用。
【旨趣】 尿液标本经离心千里淀后或不离心尿，置于显微镜下不雅察其有形成份，如RBC、WBC、上皮细胞、管型及结晶等，协助会诊和鉴别会诊泌尿系统疾病。
【器材】 水平离心计（离心半径15cm）、刻度离心管、载玻片、盖玻片、滴管、光学显微镜
【标本】 清新尿液
一．标本汇注
1．汇注晨尿于清洁干燥一次性尿杯内，1小时内送捡，男性留中段尿，女性应躲避月信，清洁外阴后，留取中段尿。
2．尿液标本如不行立即检查，应置雪柜冷藏或按每l00ml尿加入0.5ml甲醛防腐。
二．操作
1．离心尿。
取清新混匀的晨尿l0ml于刻度离心管内，用半径15cm的水平离心计以1500r/min离心5min，吸出上清尿，留千里渣量0.2ml。
轻轻混匀千里渣，取0.02ml于置载玻片上，复以盖玻片，或将0.02ml尿千里渣涂成1.8×1.8cm2面积。
先用低倍镜不雅察细胞、管型瓜分散情况，再用高倍镜仔细分辨细胞成份，后光不宜太强，太强可使透明管型漏检。细胞在高倍镜视线下至少不雅察计数10个视线；管型在低倍镜视线下至少不雅察计数20个视线，得出每个视线的最低至最高值；结晶按高倍镜视线等分散鸿沟预计讲述，记载终结。
2．未离心尿
取混匀尿一滴于载玻片上，先低倍镜不雅察管型，再用高倍镜不雅察细胞。
三．尿千里渣在镜下的各式有形成份的形态
1. 细胞
包括红细胞、白细胞、上皮细胞、非典型细胞、吞吃细胞等。
⑴红细胞
①典型红细胞：浅黄色双凹圆盘形，多见于泌尿说念下段出血。
②皱缩红细胞：名义带刺或锯齿状，神采转深呈球形。常见于高渗尿，水份从红细胞渗出所致。
③红细胞淡影：血红卵白从红细胞中脱出，呈大小不等的空环形，称红细胞淡影或影红细胞，多来自肾脏。
镜检时，应将尿千里渣中的红细胞与脂防滴、尿酸盐结品、草酸钙结晶、真菌孢子及酵母菌相鉴别
⑵白细胞/脓细胞
外形完好意思，无昭着退行性变时，胞浆内颗粒明晰可见，胞核明晰，分散存在于尿中；炎症时白细胞增多，有退行性变性，细胞结构浑沌，核不明晰，胞浆内颗粒变粗大，细胞常粘成团，称脓细胞；在低渗情况下，中性粒细胞发生肿胀，浆内颗粒呈布郎通顺，由于光折射出现“闪光”中意，故将此种细胞称“闪光细胞”，多见于肾孟肾炎。
⑶ 上皮细胞
①扁平上皮细胞：形态扁平而大，不功令、核小、呈圆形或卵圆形。尿说念炎时，成片状零碎伴有较多的白细胞。一般来自前尿说念或妇女阴说念，量少无临床料想。
②大圆上皮细胞：胞体圆形，比扁平上皮细胞稍小，但核略大，呈圆或卵形，来自膀胱上皮表层或阴说念上皮中层。来自膀胱上皮表层的大圆上皮细胞，可因膀胱的充盈与否，胞体的大小阔别较大，充盈零碎的细胞约为WBC的4-5倍，而非充盈状态下零碎的细胞约为WBC的2-8倍，膀胱炎时可成片零碎。
③小圆上皮细胞：胞体较WBC稍大，但一般不杰出15um，核大胞浆较少，浆内常见脂肪滴及小空泡，这种细胞在尿中出当前，常示肾小管有病变，亦可来自膀脱移行上反深层，但胞核较小应防范区别。
④尾状上皮：胞体呈拖尾形或彷锤形，长约20-40μm，核较大呈圆形或卵形或梨形，来自肾孟、输尿管、膀胱及尿说念近膀胱段等处上皮中层。正常东说念主尿中不易见到，在肾盂、输尿管、膀胱颈部有炎症时，可呈片状零碎。
⑷ 非典型细胞
多为退行性变细胞、肾脏和尿路系统的肿瘤细胞，可用巴氏染色法找癌细胞。
⑸吞吃细胞(组织细胞)
胞体比白细胞大2-3倍，圆形、卵圆形或不功令，一个核，常为卵圆形，大而偏位，胞浆中有较多颗粒和吞吃物，常有空泡。
2.管型
①透明管型
无色半透明园柱形，大小横暴不一，双方平行，两头纯圆，里面结构均匀，偶有少许细颗粒，因透明度大，需要在弱光下不雅察，不然易被忽略漏检。
②颗粒管型：分粗颗粒管型和细颗粒管型。
A 粗颗粒管型：透明管型内充满粗大而浓密颗粒，其量杰出管型体积的1/3，颗粒由变性细胞来，如领受色素可呈黄褐色，外形较宽，可有不功令断裂。B 细颗粒管型：透明管型内含有较多的细小而稀疏的颗粒，由粗颗粒碎化而来，其量杰出管型的1/3，灰色或微黄色。
③腊样管型
是由细颗粒管型延续碎化而来，是细胞碎解的临了产品，在光学显微镜下形似透明管型，但角落有切迹呈泡浓样或时有蜿蜒，无色或淡黄色，外形宽大易撅断。
④细胞管型：包括红细胞管型、白细胞管型、上皮细胞管型
A 管型基质内含有红细胞，其量杰出管型体积的1/3，红细胞频频多已破灭或完好意思，称红细胞管型。
B．管型基质内含有白细胞，其量杰出管型体积的1/3或充满管型，称白细胞管型，如果白细胞发生变性称脓细胞管型。
C 管型内含有许多肾小管上皮细胞，其量杰出管型体积的1/3，细胞体积比白细胞大，称上皮细胞管型。
D 脂肪管型：管型基质内含有大量（杰出管型体积的1/3）脂肪滴，脂肪滴大小不等，圆形，折光性强，是肾小管损害后其上皮细胞发生脂肪变性，并零碎勾搭于管型中。
⑤肾衰管型
特色是外形宽大而长，不功令、易撅断，基质内带有大批颗粒，偶而呈歪曲状。是损坏的肾小管上皮细胞碎解后，在昭着扩大的和洽管内凝集而成。
3.结晶
①磺胶类药物结晶
磺胺噻唑结晶为哑铃状或对称麦杆束状、六角形
黄胺嘧啶结晶为球形放射状或不对称麦杆束状
黄胺脒结晶为长方薄板状
如结晶不典型时，可加 Ehrlich 醛试剂l滴，出现款黄色者为磺胺结晶。
②酸性尿液中的结晶
③碱性尿液中的结晶
4.其它
乳糜尿时，在千里渣中可找到微丝蚴；阴说念毛滴虫时，可在尿千里渣中见到毛滴虫。
四．留隐衷项
l．尿液标本必须实时镜检，舍弃过久，细胞和管型都可被熔解。
2．尿内如有大批非晶形尿酸盐或磷酸盐结晶时，可防碍WBC的不雅察，应极度防范。
3．妇女尿内可混入阴说念分泌物内的磷状上皮和WBC等，应取冲洗外阴后的中段尿检查。
4．离心尿中，应固定尿量、离心转速、离心时代和尿千里渣量、检查时的视线数，以便质控。
5．下列物体易被误以为管型，须防范鉴别。
A 粘液丝
透明管状，但多为绵长线形，双方不服行，角落不清，出现暗澹的长丝纹状，两头尖细卷曲有分支或自身盘旋。
B 类圆柱体
形似透明管型，但有一条尖削的螺旋形尾巴。常与透明管型同期存在，可能是和洽产生的粘液丝。
C 假管型
在粘液性纤维状物上粘附有非晶形尿酸盐或磷酸盐而形成的圆柱形，肖似颗粒管型，但其角落不整王人，两头不圆，颗粒粗细不均，加温或加酸后可立即隐藏，而真管型变性较慢。
D 其它：玻片划痕，纤维丝、毛发等，应与管型相鉴别
五．讲述方式
1．管型：离心尿在低倍下20个视线中最低值-最高值
2．细胞成份：离心尿在高倍镜下10个视线中最低值-最高值
3．尿结晶数量：在高倍镜下，以"+"暗示，按每占据1/4视线为一个"+"，用+-++++暗示结晶数量若干
4.寄生虫：查见寄生虫时，可讲述找到XXX。如找到滴虫或微丝蚴。
六．参考鸿沟
1．细胞成份RBC：0-3/HP、WBC：0-5/HP，扁平上皮少许(成年女性可多见)大圆上皮偶见/HP
2．透明管型：0-1/LP
3.尿结晶：少许/HP（尿酸、草酸钙或磷酸镁）
七．温习想考题
1．尿中各式细胞、管型各有什么形态，它们是怎样形成的?各有何临床料想?
2．尿中可出现哪些有料想的结晶?其形态怎样?
3．尿千里渣镜检应防范哪些问题？
4．尿千里渣中细胞的若插手尿卵白质含量是否成正比?为什么?
实验十一 尿液细胞和管型计数
【办法要求】
1、进一步识别和掌捏尿千里渣有形因素的形态特征；
2、掌捏尿千里渣内细胞和管型的计数次第。
【旨趣】 通过计数一定时代内尿液中的管型和细胞数量，了解肾脏损害的进程，为会诊泌尿系统疾病提供依据。
【器材】 刻度离心管、细胞计数池、滴管、离心计、显微镜
【标本】 清新尿液
一．爱迪氏〈Addis〉计数
测定夜间 12 小时浓缩尿中的管型和细胞数 .
㈠ 标蓝本集：
1．病东说念主从试验当日早起，正常饮食外，一日夜内少饮水使尿液浓缩。
2．晚上8时正，病东说念主排尿弃去，留取至次晨8小时正的12小时一起尿液，按l00ml加10%甲醛或麝香草酚0.5ml防腐（启动留尿即加于清洁干燥的容器内），记载尿量。
3．女病东说念主在留尿液时，应先冲洗外阴后再排尿，幸免阴说念分泌物内的细胞混入尿液内而影响终结。
㈡ 操作：
1．将留取尿液充分混匀后，测定比密，如比密低于1.016者，不作计数。
2．取充分混匀的尿液10ml置刻度离心管以15OOr/min离心10min。
3．用滴管吸去9ml上清液，留1ml充分混匀后，滴加在细胞计数板上，充池。
4．用低倍镜计数10个大方格的管型数，记载之，再用高倍镜计数10个大方格内的细胞数（分别数红细胞数和白细胞数-包括小圆上皮细胞数）并记载之。
㈢ 计算：
N=（1000×C×V）/10=100CV
N:12小时夜尿细胞或管型数
C:计数10个大方格(lul)内的细胞或管型数
V:12小时夜尿的尿量(ml)，式等分母10为离心尿液的浓缩倍数
㈣ 参考鸿沟：
透明管型 <5000/12小时夜尿，(相当于成例尿千里渣镜检 0-1个/HP)
红细胞 <50万/12小时夜尿，(相当于成例尿千里渣镜检0-2个/HP)
白细胞 <100万/12小时夜尿，(相当于成例尿千里渣镜检0-5个/HP)
㈤ 留隐衷项：
如尿液因盐类结晶而混浊，会影响计数，测尿PH，如为酸性尿液，连瓶浸入温水〈不高于37℃〉中有顷，使尿酸盐熔解；如为碱性尿，可加1%醋酸 1-2 滴篡改至刚呈酸性，使磷酸盐结晶隐藏。
二．1小时细胞排泄率试验
㈠ 标蓝本集：
病东说念主不必放荡饮食，但不行使用利尿剂和过量饮水，准确留取上昼(6时30分嘱受试者排空膀脱，留至9时30分)3小时一起尿液，立即检查。
㈡ 操作：
按12小时尿液细胞和管型计数进行操作，分别计数红细胞和白细胞并记载之
㈢ 计算：
N=1000CV/10T=100CV/T
N:每小时细胞排出数
C:10个大方格的红细胞〈白细胞〉数
V:3小时尿量
T:留尿标本经过的小时数
㈣ 参考鸿沟：
红细胞:男<3万/时， 女<4万/时
白细胞:男<7万/时， 女<14万/时
㈤ 温习想考题:
1.试比较爱迪氏千里渣计数和1小时细胞排泄率有哪些不同?各有何优瑕玷?
2.请分析你作的成例尿千里渣计数终结，讲明可能是什么原因?
实验十二 尿液理学、化学实验、尿液分析仪（抽象性试验）
【教悔内容】
1、尿液理学检查：尿神采、透明度不雅察，尿比重测定。
2、尿液试纸条检测次第、影响因素。
3、尿液卵白质、尿糖等化学实验。
4、尿液妊娠实验。
【办法要求】
1、掌捏尿液理学检查和尿液酸度历练；
2、掌捏尿卵白、尿糖、酮体、胆红素、尿胆原等定性检查的次第、旨趣。
3、老到以上历练的次第学评价、临床料想及留隐衷项。
3、老到尿液妊娠实验的次第、临床料想。
【器材】离心计、试管、滴管、吸管（5ml，10ml）、载玻片、显微镜
【试剂】亚硝基铁氰化钠、浓氨水、10g/LBaCL2、Fouchets试剂、对二甲氨基苯甲醛试剂、HCG试带、乙醚 (AR)、 苏丹Ⅲ饱和溶液
【操作】
1．尿酮体检查
（1）lauge法：取清新尿20ml于盛有亚硝基铁氰化钠30mg的试管中，轰动使亚硝基铁氰化钠熔解，加乙酸0.5ml混匀，歪斜试管浅近加入浓氨水1ml于上部，使两液有界面。
（2） 试带法
2．尿胆红素检查
（1）Harrison法：尿5ml+100g/LBaCL22.5ml，离心3~5min，弃上清，加入Fauchets试剂2~3滴不雅察终结。
（2）试带法
3．尿胆原定性试验
（1）改良Ehrlich法：含胆红素：尿︰BaCL2=4︰1，2000r/min离心5min，撤回胆红素，取上清液试验。不含胆红素：尿3ml+试剂0.3ml，室温静置10min，不雅察终结。
（2）试带法
4．乳糜尿检查：乙醚萃取试验
5．尿HCG检查：试带法
实验十三 大便成例，隐血，精液成例检查
【教悔内容】
1、大便理学检查：神采、性状不雅察。
2、大便的隐血实验及显微镜检查。
3、精液成例历练。
【办法要求】
1、掌捏粪便理学检查、化学检查；
2、能识别粪便内各式物体的形态特征和讲述方式；
3、掌捏精液成例历练模式的内容、次第及临床料想；
一、大便成例、隐血实验
【器材】
显微镜、试管、干锅、载玻片、血红卵白吸管、血细胞计数盘、恒温水浴箱
【试剂】
饱和石炭酸、生理盐水、冰醋酸、 10g /L邻联甲苯胺溶液、3%H2O2、 30g /L匹拉米同酒精液、隐血试剂条。
【操作】
1、大便成例检查
1）标本汇注
2）理学检查：神采、性状
3）显微镜检查：涂片制作，低倍镜不雅察，高倍镜不雅察
讲述方式：大便神采、性状
镜检：①未发现颠倒成份：可讲述无颠倒发现
②发现颠倒成份：讲述方式：××虫卵× ~××个/LP
2、粪便化学检查
1）隐血试验
①匹拉米同酒精1滴+冰醋酸1滴+3%H2O21滴，不显色，竹签挑取粪便，不雅察神采变化。
②无色雀绿法。 ③邻联甲苯胺法。④肌红卵白试验旨趣。
2）粪胆素试验：取黄豆大小的粪便+饱和氯化汞溶液4ml与粪便调匀。
二、精液成例检查
【器材】
光学显微镜、恒温水浴箱、中小号试管、Hb吸管，血细胞计数盘
【试剂】
1、精子稀释液:
NaHC03 5.Og+40%甲醛lml+蒸馏水至l00ml
2、生理盐水。
【操作】
(一) 标本汇注:
1、标本汇注的时机：在汇注精液标本前，必须禁欲3-5天，一般不杰出5天。禁欲时代太长，精液量加多，而精子活力下落。以手淫法或体外排精法病东说念主我方汇注送检。不行排精病东说念主用前哨腺按摸法、电子涟漪法汇注、避孕套法因其含有对精子无益的物资，可杀死精子或影响精子的活力，不主张用此法。
2、无论用什么次第汇注标本，都应将精液一起汇注子清洁干燥的大口容器内，应于30分钟内送检，冬季保温送检。因精子生成数量日间变化较大，不行依据一次检测终结作念出会诊，一般应阔别1-2周检查一次，一语气检查2-3次。
(二) 理学检查:
l、量:正常东说念主精液量为2-5ml，小于1ml或大于8ml都不正常。
精浆是精子行动的介质，可中庸阴说念的酸性分泌物，提供精子的糊口环境。精液量减少，不利于精子通过阴说念插足子宫和输卵管，影响受精。见于前哨腺和精囊病变，射精管阻拦，先天性精囊缺如。精液量增多，精子被稀释，也可致不育。雄激素水平升高所致。
2、神采:正常东说念主精液为灰白色或乳白色，久未射精者(10天以上)可略带黄色。
红色:血性精液，见于生殖系统炎症，结核和肿瘤等。
黄色或棕色:浓性精液，见于精囊炎和前哨腺炎。
3、精液液化时代:
精液液化：指排精后，精液从胶冻状篡改为流动状的过程，不雅察液化时代，标本应放37℃，每10分钟不雅察一次。精液离体后5-10分钟启动液化，频频30分钟液化完全。
杰出1h仍不液化或液化不完全属于颠倒，可扼制精子活力，减少受孕契机。
24小时精液不液化，则不作能显微镜检查，径直讲述“24小时不液化”。
4、精液的酸碱度:精液pH测定应在射精后1h内完成，用精密pH试纸测定，正常为PH7.2-7.8。
pH<7.0，伴少精，常反应输精管阻拦或先天性精囊缺如；pH>7.8，见于急性前哨腺炎、精囊炎、附睾炎。
（三）显微镜检查:
取已液化的精液于洁净载玻片上，加18×18mm盖玻片，先以低倍镜检查有无精子，如无精子则将精液离心后取千里淀涂片检查，仍不见精子，即讲述为无精子，其他试验均可不作念，这是男性不育的主要原因，如有再作以下检查。
1、精子存活率:
在镜下计数100个精子，分活精子与不行动的精予求出行动精子行动率〈湿片检查如室温低于 10 ℃时 ， 应放 37 ℃ 5~10 分钟后镜检 ).
行动精子存活率 = 行动精子数
行动精子数 + 不行动精子数
正常精液行动精子在排精后 30~60 分钟内就有 80~90%， 至少应大于 60%， 排精后 90~181 分钟内， 保温条目下应有 50% 以上的行动精子。
2 、精子行动才略
此项是检查精子行动的质料 ， 即精子行动强度可分五级讲述 .
①、0 级 ： 为死精子 ， 有精子的形态但无行动 ， 加温后仍不行动 .
②、I 级 ： 行动不良，精子通顺迟缓 ， 原地打转 ， 摇动或抖动
③、Ⅱ级 ：行动尚可 ， 慢速移动 ， 标的不定 ， 不呈直线通顺 ， 常带回旋。
④、 Ⅲ 级 ： 通顺中速 ， 呈直线通顺。
⑤、Ⅳ级 ： 行动精真金不怕火 ， 为快速直线行动 ， 很快通过一个视线 .
正常精子活能源在Ⅲ 级以上 ，o 级和 I 级精子 >40%以上为男性不育症的原因之一 .
3 、精子形态 :
在检查精子活能源的涂片上径直不雅察计数 100 个精子中形态颠倒的精子数，亦可经染色后不雅察：
①、正常精子形态 : 分头、颈〈体〉、尾三部分 ， 形如蝌蚪状 ， 头长 3~5um 、宽 2~3um，精予全长约 50~60m.
②、颠倒精子形态:分头部颠倒、体部颠倒和尾颠倒 .
头部颠倒有：大头、小头、尖 头、双头、梨状头、无定型头及头部角落不王人。
体部颠倒有 ： 分枝、双体、体部肿胀或无体部。
尾部颠倒有 ：双尾、卷曲尾、短尾、无尾。
正常精液中 ： 颠倒精子应<10~15%，>20% 为不正常。
4 、细胞:
正常精液中 ， 红细胞。 0~1/PH白细胞 <5/PH， 上皮细胞和精原细胞 0~1/PH，查到上述细胞应如数讲述 .
5 、精子计数
〈 1 〉、旨趣 ：利用重碳酸钠剖析粘液的作用来阻碍精液稠性 ， 甲醛固定精子 ， 然后稀释计数 .
〈 2 〉、操作
①、取 精子稀释液 0.38ml 十已液化混匀精液 0.02ml 〈血红卵白吸管取 ) 混匀 ，
滴加血细胞计数板 ， 静置 3 分钟 .
②用高倍镜计数中央大方 格内 5 个中方格的精子数 ， 乘以 109即为每升精液中的精子数 .
〈 3 〉计算公式 ：精子数 /L= 5中方格精子数× 5×lO × 2O×106
一次排精子 总和 = 精子数 /L×精液量〈ml 〉
1000
正常精液精子数/L为 (60~1O0)×109
至孕的低限为 2O×l09/L
一次排精精子总和为( 4"~6 ) ×l08
6、其他：如发现存结晶体、磷脂体、淀粉样体等照实讲述
实验十四 阴说念分泌物成例历练及染色
【办法要求】
1、掌捏阴说念清洁度检查。
2、掌捏阴说念分泌物的涂片制备次第。
3、掌捏革兰染色次第。
4、掌捏阴说念分泌物涂片染色中的各式有形因素的形态。
【器材】
光学显微镜、玻片
【试剂】
生理盐水、革氏染液
【操作】
（一）、标本汇注
用消毒棉签自阴说念后穹隆部汇注分泌物，浸入盛有生理盐水1-2ml的试管内，立即送检
（二）、显微镜检查
用阴说念分泌物生理盐水夹杂物混匀涂片作清洁度检查 ， 滴虫检查、霉菌检查和细菌检查 .
1 、清洁度检查：
用高倍镜不雅察涂片上的上皮细胞、白细胞 ( 脓球 ) 、杆菌球菌的若干 ， 差异明晰 ， 见下表 :
阴说念分泌物清洁度判断
清洁度 杆菌 球菌上 皮细胞 白细胞或脓细胞
Ⅰ ++++ - ++++ O~5/HP
Ⅱ ++ - ++ 5~15/HP
Ⅲ - ++ - 15~30/HP
Ⅳ - ++++ - >30/HP
2 、滴虫检查 :
冬天应将汇注的标本保温送检 ， 在涂片上先用低倍镜寻找比白细胞大能行动的物体，如见到有通顺的比白细胞大的物体时 ， 转高倍镜不雅察鉴别滴虫为一梨形透明白色小体 ， 有波动膜和鞭毛。
讲述方式 ：( 未〉找到滴虫。
3 、霉菌检查：
在阴说念分泌物涂片上加 1 滴 100g/L 氢氧化纳溶液 1 滴混匀， 先用低倍镜寻找菌丝样物 ，若有菌丝样物时 ， 转高倍镜鉴别确为菌丝及孢子〈偶而不见孢子〉为霉菌 .
讲述方式： 〈未〉找到霉菌。
4 、细菌 :
将涂片用革兰氏染色后找联系病原体 ， 如革兰氏阴性双球菌 ， 应试虑淋病双球菌 ， 其它革兰氏阴性杆菌、阳性杆菌、阳性球菌均为杂菌 ， 可依据其数量作讲述 .讲述方式 ： 找到 革兰氏染 色阴性〈阳性 〉球〈杆菌〉 .
实验十五 浆膜腔积液的历练（含细胞染色分类）
【办法要求】
1、掌捏浆膜腔积液的常用历练模式的内容、旨趣及次第；
2、了解浆膜腔积液涂片细胞染色历练次第和各式细胞形态；
【器材】
比密计或折射仪、 光学显微镜、 100ml量筒、小号试管、 Hb吸管、血细胞计数盘、
【试剂】
100g/LEDTA钠盐、 冰醋酸。
【操作】
1、标本汇注：无菌穿刺术汇注、分装于两支无菌试管内。一支加100g/LEDTANa20.15ml，另一支不加抗凝剂，用以不雅察凝固中意。
2、理学检查
1）神采。2）透明度。3）凝固性。4）比密：用比密计或折射仪测定比密。比密<1.018为漏出液，比密度>1.018为渗出液。
3、化学检查
1）李凡他试验：浆液粘卵白试验
操作：在100mldH2O中加入冰醋酸2~3滴，加入穿刺液1滴，出现白色混浊为阳性，无昭着中意为阴性。
4、显微镜计数
1）.细胞整个数
2）.WBC计数
3）.WBC分类计数
5、将穿刺液离心后用千里渣涂片作瑞氏染色，作细胞分类，至少应数100个WBC。