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1Ningxia Grape Plantlet Engineering and Technology Research Centerai 萝莉， Yinchuan
2Nningxia State Farm Xixiawang Industry Co.， Ltd.， Yinchuan
Email: langfh2011@163.com
Copyright © 2014 by authors and Hans Publishers Inc.
This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY).
Received: Jun. 23rd， 2014; revised: Jul. 20th， 2014; accepted: Jul. 25th， 2014
ABSTRACT
In this study， test-tube plantlets of three vegetatively propagated lines from wine grape cultivar “Heibinnuo” were selected as plant materials to investigate the effects of subculture times on plant traits and transplanting survival rate of various vegetatively propagated lines. The results indicated that with the increase of subculture times and subculture prolonging three vegetatively propagated lines from wine grape cultivar “Pinot Noir” maintained the original plant traits of the cultivar in leaf shape， leaf color and shoot buddy etc. Subculture times have no effects on plantlet rate and survival rate. Therefore， we proposed that “cutting culture method” does not affect micro-propagation characteristics and plant life vigor of wine grape cultivars.
Keywords:Wine Grapes， Micro-Propagation， Subculture Times， Plant Traits， Transplanting Survival Rate
不同继代次数对酿酒葡萄黑比诺植株性状 和移栽成活率的影响
郎凤红1，何金柱1，郭惠萍2，杨贵荷1，任彦青1，周 彬1，黄海蓉1，张 蕾1
1宁夏葡萄苗木匠程本领研究中心，银川
2宁夏农垦西夏王实业有限公司，银川
Email: langfh2011@163.com
收稿日历：2014年6月23日；修回日历：2014年7月20日；拜托日历：2014年7月25日
摘 要
以酿酒葡萄黑比诺三个养分系试管苗为考研材料，研究了不同继代次数对不同养分系植物样式学和移栽成活率的影响。后果标明，跟着继代次数和继代时刻的加多，酿酒葡萄黑比诺试管苗不同养分系在叶形、叶色、枝芽等植物学样式上仍保抓该品种的原有特质；继代次数对成苗率和移栽成活率均无影响。因此， “节培法”继代不影响酿酒葡萄品种的繁衍特质和植株生涯力。
要津词
酿酒葡萄，微繁衍，继代次数，植株特质，移栽成活率
1. 小引
连年来我国西部酿酒葡萄产业发展很快，这里多数地区，征象干燥，日夜温差大，日照富足，泥土呈沙性，富含钙质，极故意于葡萄根系的滋长，分娩出的葡萄糖酸比适合，适合酿酒葡萄的分娩。采前两月雨量襄理，病虫害少，分娩的葡萄是真实的绿色食物。世界和宇宙公认我国西部是分娩优质高级葡萄酒原料较理念念的地区，现东部一些葡萄酒企业纷繁到甘肃、宁夏和新疆等地缔造原料基地，这些省区都把酿酒葡萄产业列为上风产业，要作念大作念强这一上风产业[1] [2] ，需一批优良酿酒葡萄养分系和脱毒苗木，而惯例方法难以得志，应用近代生物本领——试管繁衍，是责罚这一问题的最灵验门道[3] -[6] ，但葡萄离体快繁能否保抓原良种特质，是否随继代次数的加多，植株生涯力着落，关联此这方面报导较少。周万海等报导了红提葡萄试管苗继代2代、12代、24代、60代后对植株性状和遗传沉稳性莫得影响[7] 。曹孜义报谈一些鲜食葡萄品种，随继代次数的48~80代，经6~8年试管培养，未发现其增殖倍数着落，但经继代培养5年移栽后，成活率略有着落，为郑重起见，提出卓越5年的应再行从优株取材[3] ，但关联酿酒葡萄不同养分系和继代次数对植株性状和移栽成活率影响尚未见有报谈[3] [5] [6] 。为此，本文对酿酒葡萄黑比诺试管苗，不同养分系、不同继代次数的该酿酒葡萄品种的植物样式学和移栽成活率作念以报谈，为酿酒葡萄试管苗能否永恒继代繁衍提供一定参考。
2. 材料与方法
2.1. 考研材料
黑比诺(Heibinnuo) (此品种不清是什么养分系)代号：“比”，2010年6月取自兰州市冷静区农业科学推行站；黑比诺777代号：“七”、黑比诺292代号：“九”，2012年7月取自甘肃省张掖市国风酿酒葡萄无病毒母本园。取材消毒和繁衍方法见曹孜义等和咱们的报谈[3] [5] [7] 。
2.2. 移栽
移栽方法见曹孜义的起始报谈的葡萄试管苗工场化分娩的工艺经过[3] [5] 。移栽过程略作念了改良，用葡萄试管简便繁衍，详见专利[8] 。移栽前转入老本低的蛭石培养基中，等葡萄试管苗长至瓶口，进行光培真金不怕火苗→育苗盘真金不怕火苗(50孔)→温室养分钵真金不怕火苗→大棚或田间。
2.3. 统计方法：
琼脂培养基中培养每30 ± 2天转管培养，为一次继代培养，从驱动消毒，萌生成苗，剪取带芽的茎段转管为第一代，自后每一月将带单芽茎段再转采纳为第二代，步骤类推为继代次数。把各月葡萄试管简便繁衍和在相宜季节移栽的苗数按年、月远离把换取养分系归类，统计移栽数和移栽成活数，以移栽的成活苗数去除该总移栽数即为该代的成活率。比拟黑比诺不同养分系、不同继代次数试管苗的植株样式特征和移栽成活率，以此来判断继代次数对酿酒葡萄植株样式特征和移栽成活率有无影响。
3. 后果与分析
3.1. 黑比诺不同养分系不同继代次数试管苗的植株样式特征
黑比诺三个品种和养分系在植株样式学上莫得各别，黑比诺品种和养分系在产量和酿酒特征不同，黑比诺777穗大果大，产量略高，酿酒品性中，黑比诺292穗和果略小，产量中，酿酒品性上，黑比诺介于其间[9] 。不雅察了三个不同养分系不同继代次数，在不同庚份和不同继代次数，植株样式学上保抓一致，仍与原植株相同，莫得变异。
3.2. 黑比诺不同养分系、不同庚代，换取最好移栽月份，不同继代次数育苗盘的移栽成活率
把不同庚份，换取最好移栽月份的不同养分系、不同继代次数的黑比诺蛭石苗，光培后栽入50孔林木育苗盘中，移入养分钵中统计了三个黑比诺养分系蛭石苗的成活率，后果见表1。
从表1可见，在三个黑比诺品种和养分系在不同庚份和不同继代次数，在最好移栽月份下无论继代8次、20次、21次、33次、45次多数移栽后果成活率周边，都在85%~89%，莫得统计学上的显着各别，标明继代次数若干不影响移栽成活率。
3.3. 黑比诺磨灭养分系、同时移栽的不同成活率
2012年驱动移栽最早取材是继代21次的黑比诺，用了不同移栽基质，移栽成活率不同，考研后果见表2，从表2中可看出，优质花草土移栽成活率显赫高于平庸花草土，标明酿酒葡萄试苗移栽基质对移栽成活率影响较大。
3.4. 不同养分系、不同继代次数对光培成活率的影响
把黑比诺不同养分系、不同继代次数的琼脂试管苗转入蛭石培养基中，每瓶转接8个双芽茎段，在培养室培养，当长至瓶子口时取出在当然光下(20000lx)进行光培真金不怕火苗，自后光强渐增、湿度渐降，至一谈开盖，出瓶时统计成苗数，以此当作光培成活率，后果见表3：从表3可见，不同养分系、不同继代次数的琼脂试管苗转入蛭石培养基进行光培成活率不一，继代次数43~45代的黑比诺，高于继代18~20代的黑比诺292。光培成活率与月份和管制水平关联，而与继代次数无关。表3还可见，黑比诺“比”2014年继代培养43~45代后，光培成活率基本周边。黑比诺777，继代18~20代次数加多还略有加多，而黑比诺292，18~20代次数的光培成活率实足换取，但比黑比诺777低，这是不同养分系之间的各别，与继代次数无关，看来三个黑比诺继代次数与光培成活率无显着研究。
3.5. 黑比诺不同养分系、不同继代次数的不同庚份和月份的移栽成活率
经光培真金不怕火苗后的蛭石苗栽入温棚花草养分土的50孔林木育苗盘中，后光辉渐加多、湿度渐裁汰，20天后统计育苗盘中的成活率，后果见表4：从表4可见，不同养分系、不同继代次数的光培真金不怕火苗后的蛭
石苗栽入温棚花草养分土的育苗盘中，成活率各别较大，从50.0%到99.1%，这与移栽年份、季节、移栽要求、管制水对等密切研究。如黑比诺“比”2013年2~3月移栽气温较低，温棚加温跟不上变成成活率特低。2014年温棚改建后，责罚温度不及，移栽成活率大幅晋升，继代次数虽加多12代，移栽成活率反而晋升30%~55%。从一年中移栽月份的成活率不一，严寒的冬季和炎夏的夏令不进行移栽，移栽最适月份是4月，次为3月和5月，因此继代次数影响移栽成活率远比年份、季节、移栽要求、管制水对等为低。
3.6. 黑比诺不同养分系、不同继代次数秋季移栽，次年再植的成活率
葡萄范畴化试管繁衍，在最相宜的季节最易成活，在春季移栽虽畴前能出及格的商品成苗，但时刻短，移栽过分王人集，变成开发、工具和东谈主工的压力太大，影响脱毒葡萄试管苗繁衍速率和效益，为了克
服这一不及，改良了工艺经过，应用秋季分娩半制品苗，次年挖出栽入温棚或大田，看黑比诺不同养分系、不同继代次数移栽的成活率奈何？从这反馈了植株的生涯力，统计后果见表5：表5标明不同继代时刻的秋季半制品苗，次年再栽入温棚的黑比诺不同养分系、不同继代次数移栽的成活率有一定各别，继代次数38~40代的黑比诺“比”比高于继代12~14代少的黑比诺777、292，还卓越约10~20个百分点，要是继代次数加多生涯力裁汰，那么继代次数加多了二倍，移栽成活率反而显着加多，这讲明继代次数影响植株的生涯力，这也标明酿酒葡萄继代培养代数的加多并未不裁汰植株的生涯力。
从以上5个方面证据了无论继代培养8次、20次、21次、33次、45次多数移栽后果考研标明三个养分系，不同继代次数的植物学性状保抓不变，植株生涯力也不会因为继代次数加多而裁汰，标明这种离体微繁能用于酿酒葡萄优良养分系的快繁，与葡萄生食物种相同，在分娩上可多数应用[4] -[6] [10] 。
4. 盘考
植物组织培养再生植株随继代次数的加多，并伴跟着植株生涯力着落和遗传不沉稳性加多，已有不少报谈，而况觉得与基因型、再生表情、器官类型和植物激素等关联[3] [6] 。育种角度开拔，植物组织培养中发生变易是故意的，而从良种离体微繁是不利的。曹孜义等起始已报谈了葡萄离体微繁用的“节培法”，即葡萄试管小型插扦，与数千年的葡萄惯例插扦方法繁衍相同，能高度保抓原葡萄优良品种的遗传特质和生涯力[4] -[6] ，周万海等报谈用“节培法”继代繁衍2、12、24代、64代对红提葡萄试管苗繁衍对该品耕种物性能状和遗传沉稳性影响莫得影响[10] 。宋润刚等[11] 报谈山葡萄品种脱毒遗传沉稳性及分娩性能研究中，经过4年离体繁衍也能保抓原品种特质。Quoirn，Lupoivro报谈苹果经10年离体繁衍，莫得发现变异状态[12] 。师校欣等报谈苹果离体新梢外植体经过20年培养，继代160次，其再生才能莫得发生显赫变化[13] ，这些都与咱们的论断换取。但通过细胞、组织、愈伤组织教会不定芽，跟着继代次数的加多，就有可能发生变异和生涯力着落问题。王正询和刘鸿先在香蕉试管繁衍染色体数目畸变的研究中发现高次数的试管苗染色体畸变率显赫增高[14] 。这是繁衍方法不同而不同。因此酿酒葡萄应用曹孜义等的“节培法”，如同葡萄惯例数千年用扦插繁衍相同，年年用这种方法，能保抓良种的特质相同，不外“节培法”是在试管内“扦插”，一月继代一次，故继代次数不会影响到酿酒葡萄品种快繁的品种特质和植株生涯力。
致 谢
本文是在甘肃农业大学曹孜义西宾指挥下完成的，在此致谢。
参考文件 (References)ai 萝莉